培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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產品名稱：鞏膜上皮細胞

產品規(guī)格：5×105

貨號：BH-X019922

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供**熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。

（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。

（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。

 生理變化：

（1）主動脈硬化。

（2）主動脈瘤

（3）主動脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

Potato Dextrose Agar    

慶大霉素（50mg/ml）

Gentamicin    推薦濃度：0.5-50ug/ml

保存15-30°15750-060

假單胞顯色培養(yǎng)基    用于假單胞的分離及鑒定1000ml

Kligler 鐵瓊脂 (CM0033)    Oxoid

胰蛋白示瓊脂基礎 (CM0233)    Oxoid

Dermasel 瓊脂 (CM0539)    Oxoid

營養(yǎng)肉湯（NB）    1000(g)

鞏膜上皮細胞花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)elisa檢測試劑盒英文名稱：ALOX-5 ELISA Kit，英文縮寫：ALOX-5，產品別名：花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA檢測試劑盒，花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

骨成型蛋白4(BMP-4)elisa檢測試劑盒英文名稱：BMP-4 ELISA Kit，英文縮寫：BMP-4，產品別名：骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA檢測試劑盒，骨成型蛋白4(BMP-4)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PPARGC1 ELISA Kit，英文縮寫：PPARGC1，產品別名：過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA檢測試劑盒，過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

高爾基蛋白73(GP-73)elisa檢測試劑盒英文名稱：GP-73 ELISA Kit，英文縮寫：GP-73，產品別名：高爾基蛋白73(GP-73)ELISA檢測試劑盒，高爾基蛋白73(GP-73)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

鈣調素(CAM)elisa檢測試劑盒英文名稱：CAM ELISA Kit，英文縮寫：CAM，產品別名：鈣調素(CAM)ELISA檢測試劑盒，鈣調素(CAM)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)elisa檢測試劑盒英文名稱：SP-A ELISA Kit，英文縮寫：SP-A，產品別名：肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA檢測試劑盒，肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

多巴胺脫羧酶(DDC)elisa檢測試劑盒英文名稱：DDC ELISA Kit，英文縮寫：DDC，產品別名：多巴胺脫羧酶(DDC)ELISA檢測試劑盒，多巴胺脫羧酶(DDC)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

低密度脂蛋白受體相關蛋白4(LRP-4)elisa檢測試劑盒英文名稱：LRP-4 ELISA Kit，英文縮寫：LRP-4，產品別名：低密度脂蛋白受體相關蛋白4(LRP-4)ELISA檢測試劑盒，低密度脂蛋白受體相關蛋白4(LRP-4)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

膽酸(Cholic acid)elisa檢測試劑盒英文名稱：Cholic acid ELISA Kit，英文縮寫：Cholic acid，產品別名：膽酸(Cholic acid)ELISA檢測試劑盒，膽酸(Cholic acid)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

促生長釋放(GHRH)elisa檢測試劑盒英文名稱：GHRH ELISA Kit，英文縮寫：GHRH，產品別名：促生長釋放(GHRH)ELISA檢測試劑盒，促生長釋放(GHRH)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

超敏熱休克蛋白60(HSP-60)elisa檢測試劑盒英文名稱：HSP-60 ELISA Kit，英文縮寫：HSP-60，產品別名：超敏熱休克蛋白60(HSP-60)ELISA檢測試劑盒，超敏熱休克蛋白60(HSP-60)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。